英國首相梅伊在3月28日晚間簽署脫歐的通知書，並由英國駐歐盟大使巴羅在隔日交到歐洲理事會主席圖斯克手中，正式啟動脫歐程序，而主張留歐的蘇格蘭則醞釀二度舉辦獨立公投，尋求留在歐盟的機會，不過西班牙顧慮自身內部的分離主義，向來反對蘇格蘭獨立，但《衛報》引述西班牙外長達斯蒂斯說法稱，倘若蘇格蘭合法獲得獨立地位，西班牙不會阻擋蘇格蘭加入歐盟。
Spain ‘would not block’ an EU application from independent Scotlandhttps://t.co/a2gVjBe9kl pic.twitter.com/1EDn3gu1y9
— The Scotsman (@TheScotsman) 2017年4月2日
蘇獨影響加泰隆尼亞、巴斯克分離運動
位在大不列顛島北部的蘇格蘭主張留在歐盟，隨著英國脫歐已成定局，蘇格蘭自治政府領導人、首席部長史特金（Nicola Sturgeon）在英國遞交脫歐正式通知書之後，於3月31日致函給梅伊（Theresa May），強調英國脫歐的決定將衝擊蘇格蘭經濟，為了蘇格蘭的利益著想，蘇格蘭人民有權利選擇走自己的路，不過梅伊拒絕蘇格蘭再辦獨立公投的要求，回稱這是全英國展現團結的時候。
史特金早在3月13日就宣布，預計在2018年秋季到2019年春季間再度舉行獨立公投，倘若獨立成功，將重返歐盟懷抱，但歐盟成員國之一的西班牙大波冷水，達斯蒂斯（Alfonso Dastis）表示，西班牙反對英國分裂，「西班牙支持聯合王國（英國）的完整性，不鼓勵任何成員脫離或分裂，我們偏好他們現有的樣子」。西班牙顧慮自身內部的加泰隆尼亞和巴斯克獨立運動，因此反對蘇格蘭獨立。
My interview with @KRLS, leader of the Catalan regional government who is pushing for an independence referendum https://t.co/HIlxU2Lzv1
— Ishaan Tharoor (@ishaantharoor) 2017年3月29日
若蘇獨合法合憲 西班牙不阻擋加入歐盟
達斯蒂斯還說，如果蘇格蘭獨立成功，之後是以新國家的身分申請加入歐盟，且必須符合申請條件，不會因其「舊成員」身分而給予特別條款待遇，並強調目前有土耳其及巴爾幹半島國家等著談判加入歐盟，而蘇格蘭必須照規矩排隊，意即蘇格蘭就算獨立，也無法快速達成重返歐盟的目標，而西班牙想藉此削弱蘇格蘭尋求獨立的熱忱。
不過在英國正式送交脫歐通知書後，達斯蒂斯的發言顯示西班牙態度改變，他告訴《衛報》，西班牙依舊反對蘇格蘭獨立，但若蘇格蘭獨立成功，且在未來申請加入歐盟的時候，西班牙不會阻擋，「我們不想發生此事（蘇獨公投），但若合法且合憲，我們不會阻擋，我們不鼓勵任何成員國分裂，因為這可能導致未來走向不同方向」。
Alfonso Dastis, the Spanish foreign minister, confirms Spain would NOT veto Scotland's EU membership #ScotRef pic.twitter.com/MaDRsVUhQZ
— Jamie Szymkowiak (@jamieszymko) 2017年4月2日
蘇獨引發歐洲瓦解危機？英國脫歐才是
蘇格蘭在2014年舉辦獨立公投，當時更強調這樣的公投是「一代一次」（once in a genaration），當時的西班牙極力反對，西班牙總理拉霍伊（Mariano Rajoy）甚至表示，蘇格蘭獨立是場大災難，會造成歐洲瓦解的風險，而當年的蘇獨公投最後以約10%的差距落敗，但沒想到英國在2016年舉辦的脫歐公投過關，西班牙和歐盟隨即轉變態度，開始同情蘇格蘭，因為62%的蘇格蘭人選擇留歐。
歐洲執委會（European Commission）近日也明確表示，獨立的蘇格蘭可以申請加入歐盟，但如上述所言，達斯蒂斯強調「他們（蘇格蘭）必須符合成為候選國的條件，才可以展開談判」。另外，蘇格蘭若加入歐盟，也不會享有英國曾有過的優惠待遇，像是獲得歐盟退還部分所繳費用，而歐盟新規定也要求，新成員國一律使用歐元，意即蘇格蘭無法選擇使用英鎊作為流通貨幣。
93% of Scots want to maintain free trade with EU after #Brexit - but majority want to control immigration too https://t.co/x99Yc11OAE pic.twitter.com/sbDepP0NeI
— NatCen (@NatCen) 2017年3月30日
脫歐談判占上風 西班牙趁機討論直布羅陀主權爭議
根據英國獨立民調機構「國家社會研究中心」（NatCen Social Research）調查指出，儘管高達93%的蘇格蘭人支持在英國脫歐後，繼續維持與歐盟的自由貿易關係，但也有64%的蘇格蘭民眾支持自行管理移民，只是不論蘇格蘭獨立成功與否，西班牙在英國脫歐事件上已取得外交優勢，因為西班牙還趁機把直布羅陀（Gibraltar）主權爭議端上台面，作為脫歐談判的一部分。
位在伊比利半島南端的直布羅陀現由英國治理，但西班牙宣稱有主權，而直布羅陀在脫歐公投中，也是選擇留歐，因此西班牙便主張談論直布羅陀主權議題，且獲得歐盟支持，歐洲理事會主席圖斯克（Donald Tusk）在3月31日發送給各成員國的9頁談判綱領草案中提到，若西班牙就直布羅陀爭議沒獲得滿意結果，未來的英歐貿易協定將不適用直布羅陀。
